Овај чланак је део истраживачке теме „Употреба антимикробних лекова, антимикробна резистенција и микробиом животиња за исхрану“. Погледајте свих 13 чланака
Органске киселине су и даље веома тражене као адитиви сточној храни. До данас, фокус је био на безбедности хране, посебно на смањењу учесталости патогена који се преносе храном код живине и других животиња. Неколико органских киселина се тренутно проучава или је већ у комерцијалној употреби. Међу многим органским киселинама које су опширно проучаване, мравља киселина је једна од њих. Мравља киселина се додаје у исхрану живине како би се ограничило присуство салмонеле и других патогена који се преносе храном у храни и у гастроинтестиналном тракту након гутања. Како разумевање ефикасности и утицаја мравље киселине на домаћина и патогене који се преносе храном расте, постаје јасно да присуство мравље киселине може покренути специфичне путеве код салмонеле. Овај одговор може постати сложенији када мравља киселина уђе у гастроинтестинални тракт и интерагује не само са салмонелом која већ колонизује гастроинтестинални тракт, већ и са сопственом микробном флором црева. Преглед ће испитати тренутне резултате и изгледе за даља истраживања микробиома живине и хране третиране мрављом киселином.
И у сточарству и у живинарству, изазов је развити стратегије управљања које оптимизују раст и продуктивност, а истовремено ограничавају ризике по безбедност хране. Историјски гледано, примена антибиотика у субтерапеутским концентрацијама побољшала је здравље, добробит и продуктивност животиња (1–3). Са становишта механизма деловања, предложено је да антибиотици који се примењују у субинхибиторним концентрацијама посредују у одговорима домаћина модулирањем гастроинтестиналне (ГИ) флоре и, заузврат, њихових интеракција са домаћином (3). Међутим, стална забринутост због потенцијалног ширења патогена отпорних на антибиотике који се преносе храном и њихове потенцијалне повезаности са инфекцијама отпорним на антибиотике код људи довела је до постепеног повлачења употребе антибиотика код животиња које се користе за исхрану (4–8). Стога је развој адитива и побољшивача хране који испуњавају барем неке од ових захтева (побољшано здравље, добробит и продуктивност животиња) од великог интереса како са становишта академског истраживања, тако и са становишта комерцијалног развоја (5, 9). Разноврсни комерцијални адитиви за храну ушли су на тржиште хране за животиње, укључујући пробиотике, пребиотике, етерична уља и сродна једињења из различитих биљних извора, и хемикалије као што су алдехиди (10–14). Остали комерцијални адитиви за храну који се често користе код живине укључују бактериофаге, цинк оксид, егзогене ензиме, производе компетитивне ексклузије и кисела једињења (15, 16).
Међу постојећим хемијским адитивима за храну, алдехиди и органске киселине су историјски били најшире проучавана и коришћена једињења (12, 17–21). Органске киселине, посебно масне киселине кратког ланца (SCFA), су добро познати антагонисти патогених бактерија. Ове органске киселине се користе као адитиви за храну не само да би се ограничило присуство патогена у матрици хране, већ и да би се активно дејствовало на гастроинтестиналну функцију (17, 20–24). Поред тога, SCFA се производе ферментацијом цревне флоре у дигестивном тракту и сматра се да играју механистичку улогу у способности неких пробиотика и пребиотика да се супротставе патогенима унетим у гастроинтестинални тракт (21, 23, 25).
Током година, разне кратколанчане масне киселине (SCFA) привукле су велику пажњу као адитиви за сточну храну. Посебно су пропионат, бутират и формиат били предмет бројних студија и комерцијалних примена (17, 20, 21, 23, 24, 26). Док су се ране студије фокусирале на контролу патогена који се преносе храном у храни за животиње и живину, новије студије су помериле свој фокус на опште побољшање перформанси животиња и гастроинтестиналног здравља (20, 21, 24). Ацетат, пропионат и бутират привукли су велику пажњу као органски кисели адитиви за сточну храну, међу којима је и мравља киселина обећавајући кандидат (21, 23). Велика пажња је усмерена на аспекте безбедности хране мравље киселине, посебно на смањење учесталости патогена који се преносе храном у храни за стоку. Међутим, разматрају се и друге могуће употребе. Општи циљ овог прегледа је испитивање историје и тренутног статуса мравље киселине као побољшача хране за стоку (Слика 1). У овој студији ћемо испитати антибактеријски механизам мравље киселине. Поред тога, детаљније ћемо погледати његове ефекте на стоку и живину и размотрити могуће методе за побољшање његове ефикасности.
Сл. 1. Мапа ума тема обрађених у овом прегледу. Посебно су се фокусирали на следеће опште циљеве: опис историје и тренутног статуса мравље киселине као средства за побољшање сточне хране, антимикробних механизама мравље киселине и утицаја њене употребе на здравље животиња и живине, као и потенцијалних метода за побољшање ефикасности.
Производња хране за стоку и живину је сложена операција која обухвата више корака, укључујући физичку обраду зрна (нпр. млевење ради смањења величине честица), термичку обраду за пелетирање и додавање више хранљивих материја у исхрану у зависности од специфичних нутритивних потреба животиње (27). С обзиром на ову сложеност, није изненађујуће да прерада хране излаже зрно различитим факторима околине пре него што стигне до млина за сточну храну, током млевења, а потом и током транспорта и храњења у оброцима сложене хране (9, 21, 28). Стога је током година у храни за животиње идентификована веома разнолика група микроорганизама, укључујући не само бактерије већ и бактериофаге, гљивице и квасце (9, 21, 28–31). Неки од ових загађивача, као што су одређене гљивице, могу произвести микотоксине који представљају здравствени ризик за животиње (32–35).
Бактеријске популације могу бити релативно разноврсне и донекле зависе од одговарајућих метода које се користе за изолацију и идентификацију микроорганизама, као и од извора узорка. На пример, профил микробног састава може се разликовати пре термичке обраде повезане са пелетирањем (36). Иако су класичне методе културе и пресађивања на плоче пружиле неке информације, недавна примена методе секвенцирања следеће генерације (NGS) засноване на гену 16S рРНК пружила је свеобухватнију процену заједнице микробиома крмних биљака (9). Када су Соланки и др. (37) испитали бактеријски микробиом зрна пшенице складиштених током одређеног временског периода у присуству фосфина, фумиганта за сузбијање инсеката, открили су да је микробиом био разноврснији након жетве и након 3 месеца складиштења. Штавише, Соланки и др. (37) (37) је показао да су Proteobacteria, Firmicutes, Actinobacteria, Bacteroidetes и Planctomyces доминантна филума у ​​зрну пшенице, Bacillus, Erwinia и Pseudomonas су доминантни родови, а Enterobacteriaceae су чиниле мањи удео. На основу таксономских поређења, закључили су да је фумигација фосфином значајно променила бактеријске популације, али није утицала на гљивичну разноликост.
Соланки и др. (37) су показали да извори хране такође могу да садрже патогене који се преносе храном и који могу изазвати проблеме јавног здравља на основу детекције Enterobacteriaceae у микробиому. Патогени који се преносе храном, као што су Clostridium perfringens, Clostridium botulinum, Salmonella, Campylobacter, Escherichia coli O157:H7 и Listeria monocytogenes, повезани су са сточном храном и силажом (9, 31, 38). Перзистентност других патогена који се преносе храном у сточној и живинској храни тренутно није позната. Ге и др. (39) су прегледали преко 200 састојака сточне хране и изоловали Salmonella, E. coli и Enterococci, али нису детектовали E. coli O157:H7 или Campylobacter. Међутим, матрице попут суве хране могу послужити као извор патогене E. coli. У праћењу извора епидемије серогрупа O121 и O26 које производе Шига токсин, Escherichia coli (STEC) из 2016. године, повезане са људским болестима, Кроу и др. (40) користили су секвенцирање целог генома да би упоредили клиничке изолате са изолатима добијеним из прехрамбених производа. На основу овог поређења, закључили су да је вероватни извор било сирово пшенично брашно са ниским садржајем влаге из млинова за брашно. Низак садржај влаге у пшеничном брашну сугерише да STEC може да преживи и у сточној храни са ниским садржајем влаге. Међутим, како Кроу и др. (40) примећују, изолација STEC из узорака брашна је тешка и захтева имуномагнетне методе сепарације да би се извукао довољан број бактеријских ћелија. Слични дијагностички процеси такође могу да искомпликују детекцију и изолацију ретких патогена који се преносе храном у сточној храни. Тешкоћа у детекцији може бити последица дугог задржавања ових патогена у матрицама са ниским садржајем влаге. Форгани и др. (41) је показао да је пшенично брашно складиштено на собној температури и инокулирано смешом ентерохеморагичне Escherichia coli (EHEC) серогрупа O45, O121 и O145 и Salmonella (S. Typhimurium, S. Agona, S. Enteritidis и S. Anatum) било квантификовано након 84 и 112 дана и још увек детектовано након 24 и 52 недеље.
Историјски гледано, кампилобактер никада није изолован из хране за животиње и живину традиционалним методама културе (38, 39), иако се кампилобактер може лако изоловати из гастроинтестиналног тракта живине и производа од живине (42, 43). Међутим, храна и даље има своје предности као потенцијални извор. На пример, Алвес и др. (44) су показали да инокулација хране за товљене пилиће са C. jejuni и накнадно складиштење хране на две различите температуре током 3 или 5 дана резултира опоравком одрживе C. jejuni, а у неким случајевима чак и њиховом пролиферацијом. Закључили су да C. jejuni свакако може преживети у храни за живину и стога може бити потенцијални извор инфекције за пилиће.
Контаминација хране за животиње и живину салмонелом привукла је велику пажњу у прошлости и остаје у фокусу сталних напора да се развију методе детекције које се посебно примењују на храну за животиње и да се пронађу ефикасније мере контроле (12, 26, 30, 45–53). Током година, многе студије су испитивале изолацију и карактеризацију салмонеле у различитим објектима за храну и фабрикама хране за животиње (38, 39, 54–61). Генерално, ове студије указују да се салмонела може изоловати из различитих састојака хране, извора хране, врста хране и производних операција хране. Стопе преваленције и преовлађујући изоловани серотипови салмонеле такође су варирали. На пример, Ли и др. (57) потврдили су присуство Salmonella spp. Детектована је у 12,5% од 2058 узорака прикупљених из комплетне хране за животиње, састојака хране за животиње, хране за кућне љубимце, посластица за кућне љубимце и додатака исхрани за кућне љубимце током периода прикупљања података од 2002. до 2009. године. Поред тога, најчешћи серотипови откривени у 12,5% узорака салмонеле који су били позитивни били су S. Senftenberg и S. Montevideo (57). У студији о храни спремној за јело и нуспроизводима сточне хране у Тексасу, Hsieh и др. (58) су известили да је највећа преваленција салмонеле била у рибљем брашну, затим у животињским протеинима, са S. Mbanka и S. Montevideo као најчешћим серотиповима. Млинови за сточну храну такође представљају неколико потенцијалних тачака контаминације хране током мешања и додавања састојака (9, 56, 61). Magossi и др. (61) су успели да покажу да се вишеструке тачке контаминације могу јавити током производње сточне хране у Сједињеним Државама. У ствари, Magossi и др. (61) су пронашли најмање једну позитивну културу салмонеле у 11 млина за сточну храну (укупно 12 локација за узорковање) у осам држава у Сједињеним Државама. С обзиром на могућност контаминације салмонелом током руковања храном, транспорта и свакодневног храњења, није изненађујуће што се улажу значајни напори у развој адитива за храну који могу смањити и одржати низак ниво микробне контаминације током целог циклуса производње животиња.
Мало се зна о механизму специфичног одговора салмонеле на мрављу киселину. Међутим, Хуанг и др. (62) су указали да је мравља киселина присутна у танком цреву сисара и да су Salmonella spp. способне да производе мрављу киселину. Хуанг и др. (62) су користили низ мутаната са делецијом кључних путева да би детектовали експресију гена вируленције салмонеле и открили да формат може деловати као дифузибилни сигнал који индукује салмонелу да нападне епителне ћелије Hep-2. Недавно су Лиу и др. (63) изоловали транспортер формата, FocA, из Salmonella typhimurium који функционише као специфичан канал формата при pH 7,0, али може функционисати и као пасивни канал извоза при високом спољашњем pH или као секундарни активни канал за увоз формат/јона водоника при ниском pH. Међутим, ова студија је спроведена само на једном серотипу S. Typhimurium. Остаје питање да ли сви серотипови реагују на мрављу киселину сличним механизмима. Ово остаје критично истраживачко питање које треба размотрити у будућим студијама. Без обзира на резултате, и даље је разумно користити више серотипова салмонеле или чак више сојева сваког серотипа у експериментима скрининга приликом развоја општих препорука за употребу киселих суплемената за смањење нивоа салмонеле у храни за животиње. Новији приступи, као што је употреба генетског баркодирања за кодирање сојева ради разликовања различитих подгрупа истог серотипа (9, 64), нуде могућност уочавања финијих разлика које могу утицати на закључке и тумачење разлика.
Хемијска природа и облик дисоцијације формијата такође могу бити важни. У серији студија, Бејер и др. (65–67) су показали да је инхибиција Enterococcus faecium, Campylobacter jejuni и Campylobacter coli била у корелацији са количином дисоциране мравље киселине и да је била независна од pH или недисоциране мравље киселине. Хемијски облик формијата којем су бактерије изложене такође изгледа важан. Кованда и др. (68) су прегледали неколико грам-негативних и грам-позитивних организама и упоредили минималне инхибиторне концентрације (МИК) натријум формијата (500–25.000 мг/Л) и смеше натријум формијата и слободног формијата (40/60 м/в; 10–10.000 мг/Л). На основу вредности МИК, открили су да је натријум формат инхибиторан само против Campylobacter jejuni, Clostridium perfringens, Streptococcus suis и Streptococcus pneumoniae, али не и против Escherichia coli, Salmonella typhimurium или Enterococcus faecalis. Насупрот томе, смеша натријум формата и слободног натријум формата била је инхибиторна против свих организама, што је ауторе навело на закључак да слободна мравља киселина поседује већину антимикробних својстава. Било би занимљиво испитати различите односе ова два хемијска облика како би се утврдило да ли је распон вредности МИК у корелацији са нивоом мравље киселине присутне у мешаној формули и одговором на 100% мрављу киселину.
Гомез-Гарсија и др. (69) тестирали су комбинације есенцијалних уља и органских киселина (као што је мравља киселина) против вишеструких изолата Escherichia coli, Salmonella и Clostridium perfringens добијених од свиња. Тестирали су ефикасност шест органских киселина, укључујући мрављу киселину, и шест есенцијалних уља против изолата свиња, користећи формалдехид као позитивну контролу. Гомез-Гарсија и др. (69) одредили су MIC50, MBC50 и MIC50/MBC50 мравље киселине против Escherichia coli (600 и 2400 ppm, 4), Salmonella (600 и 2400 ppm, 4) и Clostridium perfringens (1200 и 2400 ppm, 2), међу којима је утврђено да је мравља киселина ефикаснија од свих органских киселина против Escherichia coli и Salmonella. (69) Мравља киселина је ефикасна против Escherichia coli и Salmonella због своје мале молекулске величине и дугог ланца (70).
Бејер и др. су испитали сојеве Campylobacter изоловане од свиња (66) и сојеве Campylobacter jejuni изоловане од живине (67) и показали да се мравља киселина дисоцира у концентрацијама које су у складу са МИК одговорима измереним за друге органске киселине. Међутим, релативне потенције ових киселина, укључујући мрављу киселину, су доведене у питање јер Campylobacter може да користи ове киселине као супстрате (66, 67). Искоришћавање киселине код C. jejuni није изненађујуће јер је показано да има негликолитички метаболизам. Дакле, C. jejuni има ограничен капацитет за катаболизам угљених хидрата и ослања се на глуконеогенезу из аминокиселина и органских киселина за већи део свог енергетског метаболизма и биосинтетске активности (71, 72). Рана студија коју су спровели Лајн и др. (73) користила је фенотипски низ који садржи 190 извора угљеника и показала да C. jejuni 11168(GS) може да користи органске киселине као изворе угљеника, од којих је већина међупроизвода циклуса трикарбоксилних киселина. Даља истраживања Ваглија и др. (74) коришћење фенотипског низа за коришћење угљеника показало је да сојеви C. jejuni и E. coli испитани у њиховој студији могу да расту на органским киселинама као извору угљеника. Формат је главни донор електрона за респираторни енергетски метаболизам C. jejuni и, стога, главни извор енергије за C. jejuni (71, 75). C. jejuni је у стању да користи формат као донор водоника путем мембрански везаног комплекса формат дехидрогеназе који оксидује формат у угљен-диоксид, протоне и електроне и служи као донор електрона за дисање (72).
Мравља киселина има дугу историју употребе као антимикробно средство за побољшање хране, али неки инсекти такође могу да производе мрављу киселину за употребу као антимикробна хемикалија за одбрану. Росини и др. (76) сугерисали су да мравља киселина може бити састојак киселог сока мрава које је описао Реј (77) пре скоро 350 година. Од тада се наше разумевање производње мравље киселине код мрава и других инсеката знатно повећало и сада је познато да је овај процес део сложеног система одбране од токсина код инсеката (78). Познато је да различите групе инсеката, укључујући пчеле без жаока, шиљате мраве (Hymenoptera: Apidae), земљане бубе (Galerita lecontei и G. janus), мраве без жаока (Formicinae) и неке ларве мољаца (Lepidoptera: Myrmecophaga), производе мрављу киселину као одбрамбену хемикалију (76, 78–82).
Мрави су можда најбоље окарактерисани јер имају ацидоците, специјализоване отворе који им омогућавају да прскају отров састављен првенствено од мравље киселине (82). Мрави користе серин као прекурсор и складиште велике количине формијата у својим отровним жлездама, које су довољно изоловане да заштите мраве домаћине од цитотоксичности формијата док се не прска (78, 83). Мравља киселина коју луче може (1) служити као алармни феромон за привлачење других мрава; (2) бити одбрамбена хемикалија против конкурената и предатора; и (3) деловати као антифунгално и антибактеријско средство када се комбинује са смолом као делом материјала за гнездо (78, 82, 84–88). Мравља киселина коју производе мрави има антимикробна својства, што сугерише да би се могла користити као локални адитив. Ово су показали Брух и др. (88), који су додали синтетичку мрављу киселину смоли и значајно побољшали антифунгално дејство. Даљи доказ ефикасности мравље киселине и њене биолошке корисности јесте да џиновски мравоједи, који нису у стању да производе желудачну киселину, конзумирају мраве који садрже мрављу киселину како би себи обезбедили концентровану мрављу киселину као алтернативну дигестивну киселину (89).
Практична употреба мравље киселине у пољопривреди се разматра и проучава већ дуги низ година. Конкретно, мравља киселина се може користити као адитив сточној храни и силажи. Натријум формат, како у чврстом тако и у течном облику, сматра се безбедним за све животињске врсте, потрошаче и животну средину (90). На основу њихове процене (90), максимална концентрација од 10.000 мг еквивалената мравље киселине/кг хране сматрана је безбедном за све животињске врсте, док је максимална концентрација од 12.000 мг еквивалената мравље киселине/кг хране сматрана безбедном за свиње. Употреба мравље киселине као средства за побољшање сточне хране проучава се већ дуги низ година. Сматра се да има комерцијалну вредност као конзерванс силаже и антимикробно средство у храни за животиње и живину.
Хемијски адитиви као што су киселине одувек су били саставни елемент у производњи силаже и управљању храном (91, 92). Бореани и др. (91) су приметили да је за постизање оптималне производње висококвалитетне силаже неопходно одржати квалитет крме уз задржавање што је више могуће суве материје. Резултат такве оптимизације је минимизирање губитака у свим фазама процеса силирања: од почетних аеробних услова у силосу до накнадне ферментације, складиштења и поновног отварања силоса за храњење. Специфичне методе за оптимизацију производње силаже на пољу и накнадне ферментације силаже детаљно су разматране на другом месту (91, 93-95) и овде неће бити детаљно разматране. Главни проблем је оксидативно кварење изазвано квасцима и плесни када је кисеоник присутан у силажи (91, 92). Стога су уведени биолошки инокуланти и хемијски адитиви како би се супротставили негативним ефектима кварења (91, 92). Друга разматрања за адитиве за силажу укључују ограничавање ширења патогена који могу бити присутни у силажи (нпр. патогене E. coli, Listeria и Salmonella), као и гљивица које производе микотоксине (96–98).
Мак и др. (92) су поделили киселе адитиве у две категорије. Киселине попут пропионске, сирћетне, сорбинске и бензоеве киселине одржавају аеробну стабилност силаже када се дају преживарима ограничавајући раст квасца и плесни (92). Мак и др. (92) су одвојили мрављу киселину од осталих киселина и сматрали је директним закисељавачем који инхибира клостридије и микроорганизме који узрокују кварење, а истовремено одржава интегритет протеина силаже. У пракси, њихови облици соли су најчешћи хемијски облици како би се избегла корозивна својства киселина у облику који није соли (91). Многе истраживачке групе су такође проучавале мрављу киселину као кисели адитив за силажу. Мравља киселина је позната по свом брзом потенцијалу закисељавања и инхибиторном ефекту на раст штетних микроорганизама за силажу који смањују садржај протеина и угљених хидрата растворљивих у води у силажи (99). Стога су Хе и др. (92) упоредили мрављу киселину са киселим адитивима у силажи. (100) је показало да мравља киселина може инхибирати Escherichia coli и снизити pH вредност силаже. Бактеријске културе које производе мрављу и млечну киселину такође су додате силажи како би се стимулисало закисељавање и производња органских киселина (101). У ствари, Кули и др. (101) су открили да када је силажа закисељена са 3% (w/v) мравље киселине, производња млечне и мравље киселине прелази 800 и 1000 мг органске киселине/100 г узорка, респективно. Мак и др. (92) су детаљно прегледали истраживачку литературу о адитивима за силажу, укључујући студије објављене од 2000. године које су се фокусирале на и/или укључивале мрављу киселину и друге киселине. Стога, овај преглед неће детаљно разматрати појединачне студије, већ ће једноставно сумирати неке кључне тачке у вези са ефикасношћу мравље киселине као хемијског адитива за силажу. Проучаване су и непуферована и пуферована мравља киселина и у већини случајева Clostridium spp. Њене релативне активности (усвајање угљених хидрата, протеина и лактата и излучивање бутирата) имају тенденцију смањења, док се производња амонијака и бутирата смањује, а задржавање суве материје повећава (92). Постоје ограничења у деловању мравље киселине, али њена употреба као адитива за силажу у комбинацији са другим киселинама изгледа да превазилази неке од ових проблема (92).
Мравља киселина може инхибирати патогене бактерије које представљају ризик по људско здравље. На пример, Поли и Там (102) су инокулирали мале лабораторијске силосе са L. monocytogenes који садржи три различита нивоа суве материје (200, 430 и 540 г/кг) љуља, а затим су допунили мрављом киселином (3 мл/кг) или бактеријама млечне киселине (8 × 105/г) и целулолитичким ензимима. Известили су да су оба третмана смањила L. monocytogenes на немерљиве нивое у силажи са ниским садржајем суве материје (200 г/кг). Међутим, у силажи са средњим садржајем суве материје (430 г/кг), L. monocytogenes је и даље био детектован након 30 дана у силажи третираној мрављом киселином. Смањење L. monocytogenes изгледа да је повезано са нижим pH, млечном киселином и комбинованим недисоцираним киселинама. На пример, Поли и Там (102) су приметили да су нивои млечне киселине и комбиноване недисоциране киселине посебно важни, што може бити разлог зашто није примећено смањење L. monocytogenes у медијумима третираним мрављом киселином из силажа са вишим садржајем суве материје. Сличне студије требало би спровести у будућности за друге уобичајене патогене силаже, као што су салмонела и патогена E. coli. Свеобухватнија анализа 16S rDNA секвенце целе микробне заједнице силаже такође може помоћи у идентификацији промена у укупној микробној популацији силаже које се јављају у различитим фазама ферментације силаже у присуству мравље киселине (103). Добијање података о микробиому може пружити аналитичку подршку за боље предвиђање напретка ферментације силаже и за развој оптималних комбинација адитива за одржавање високог квалитета силаже.
У храни за животиње на бази житарица, мравља киселина се користи као антимикробно средство за ограничавање нивоа патогена у различитим матрицама хране добијеним од житарица, као и у одређеним састојцима хране, као што су нуспроизводи животињског порекла. Ефекти на популације патогена код живине и других животиња могу се грубо поделити у две категорије: директни ефекти на популацију патогена у самој храни и индиректни ефекти на патогене који колонизују гастроинтестинални тракт животиња након конзумирања третиране хране (20, 21, 104). Јасно је да су ове две категорије међусобно повезане, јер смањење патогена у храни требало би да резултира смањењем колонизације када животиња конзумира храну. Међутим, на антимикробна својства одређене киселине која се додаје у матрицу хране може утицати неколико фактора, као што су састав хране и облик у коме се киселина додаје (21, 105).
Историјски гледано, употреба мравље киселине и других сродних киселина првенствено се фокусирала на директну контролу салмонеле у храни за животиње и живину (21). Резултати ових студија су детаљно сумирани у неколико прегледа објављених у различито време (18, 21, 26, 47, 104–106), тако да се у овом прегледу разматрају само неки од кључних налаза из ових студија. Неколико студија је показало да антимикробна активност мравље киселине у матрицама хране зависи од дозе и времена излагања мрављој киселини, садржаја влаге у матрици хране и концентрације бактерија у храни и гастроинтестиналном тракту животиње (19, 21, 107–109). Врста матрице хране и извор састојака хране за животиње такође су фактори који утичу. Стога је низ студија показао да се нивои салмонеле Бактеријски токсини изоловани из животињских нуспроизвода могу разликовати од оних изолованих из биљних нуспроизвода (39, 45, 58, 59, 110–112). Међутим, разлике у одговору на киселине као што је мравља киселина могу бити повезане са разликама у преживљавању серовара у исхрани и температури на којој се исхрана обрађује (19, 113, 114). Разлике у одговору серовара на третман киселином такође могу бити фактор контаминације живине контаминираном храном (113, 115), а разлике у експресији гена вируленције (116) такође могу играти улогу. Разлике у толеранцији на киселину могу заузврат утицати на детекцију салмонеле у медијумима за култивацију ако киселине које се преносе храном нису адекватно пуфероване (21, 105, 117–122). Физички облик исхране (у смислу величине честица) такође може утицати на релативну доступност мравље киселине у гастроинтестиналном тракту (123).
Стратегије за оптимизацију антимикробне активности мравље киселине која се додаје храни за животиње такође су кључне. Веће концентрације киселине су предложене за састојке хране са високом контаминацијом пре мешања хране како би се минимизирала потенцијална оштећења опреме у млину за сточну храну и проблеми са укусношћу хране за животиње (105). Џоунс (51) је закључио да је салмонелу присутну у храни за животиње пре хемијског чишћења теже контролисати него салмонелу у контакту са храном након хемијске обраде. Термичка обрада хране током обраде у млину за сточну храну је предложена као интервенција за ограничавање контаминације хране салмонелом, али то зависи од састава хране, величине честица и других фактора повезаних са процесом млевења (51). Антимикробна активност киселина је такође зависна од температуре, а повишене температуре у присуству органских киселина могу имати синергистички инхибиторни ефекат на салмонелу, као што је примећено у течним културама салмонеле (124, 125). Неколико студија о храни контаминираној салмонелом подржава идеју да повишене температуре повећавају ефикасност киселина у матрици хране (106, 113, 126). Амадо и др. (127) користили су централни композитни дизајн за проучавање интеракције температуре и киселине (мравље или млечне киселине) код 10 сојева Salmonella enterica и Escherichia coli изолованих из различитих сточних храна и инокулираних у закисељене сточне пелете. Закључили су да је топлота доминантан фактор који утиче на смањење микроба, заједно са киселином и врстом бактеријског изолата. Синергистички ефекат са киселином и даље преовлађује, тако да се могу користити ниже температуре и концентрације киселине. Међутим, такође су приметили да синергистички ефекти нису увек примећени када се користи мравља киселина, што их је навело на сумњу да су испаравање мравље киселине на вишим температурама или пуферски ефекти компоненти матрикса хране били фактор.
Ограничавање рока трајања хране пре храњења животиња један је од начина за контролу уношења патогена који се преносе храном у тело животиње током храњења. Међутим, када киселина у храни уђе у гастроинтестинални тракт, може наставити да делује антимикробно. Антимикробно дејство егзогено примењених киселих супстанци у гастроинтестиналном тракту може зависити од различитих фактора, укључујући концентрацију желудачне киселине, активно место гастроинтестиналног тракта, pH и садржај кисеоника у гастроинтестиналном тракту, старост животиње и релативни састав гастроинтестиналне микробне популације (који зависи од локације гастроинтестиналног тракта и зрелости животиње) (21, 24, 128–132). Поред тога, резидентна популација анаеробних микроорганизама у гастроинтестиналном тракту (која постаје доминантна у доњем дигестивном тракту моногастричних животиња како сазревају) активно производи органске киселине кроз ферментацију, што заузврат може имати антагонистички ефекат на пролазне патогене који улазе у гастроинтестинални тракт (17, 19–21).
Велики део раних истраживања фокусирао се на употребу органских киселина, укључујући формиат, како би се ограничила салмонела у гастроинтестиналном тракту живине, што је детаљно разматрано у неколико прегледа (12, 20, 21). Када се ове студије посматрају заједно, може се направити неколико кључних запажања. Мекхан и Шотс (133) су известили да је храњење мрављом и пропионском киселином смањило нивое салмонеле типхимуријум у цекуму пилића инокулираних бактеријама и квантификовало их у 7, 14 и 21 дан старости. Међутим, када су Хјум и др. (128) пратили пропионат обележен C-14, закључили су да врло мало пропионата у исхрани може доспети до цекума. Остаје да се утврди да ли је то тачно и за мрављу киселину. Међутим, недавно су Бураса и др. (134) је известио да је храњење мрављом и пропионском киселином смањило нивое Salmonella Typhimurium у цекуму пилића инокулираних бактеријама, који су квантификовани у 7, 14 и 21 дан старости. (132) је приметио да је храњење мрављом киселином у количини од 4 г/т бројлерских пилића током периода раста од 6 недеља смањило концентрацију S. Typhimurium у цекуму испод нивоа детекције.
Присуство мравље киселине у исхрани може имати ефекте на друге делове гастроинтестиналног тракта живине. Ал-Тарази и Алшавабкех (134) су показали да смеша мравље киселине и пропионске киселине може смањити контаминацију Salmonella pullorum (S. PRlorum) у вољци и цекуму. Томпсон и Хинтон (129) су приметили да комерцијално доступна смеша мравље киселине и пропионске киселине повећава концентрацију обе киселине у вољци и желуцу и да је бактерицидна против Salmonella Enteritidis PT4 у in vitro моделу под репрезентативним условима узгоја. Ову идеју поткрепљују in vivo подаци од Берда и сарадника (135) који су додали мрављу киселину у воду за пиће бројлерских пилића током симулираног периода поста пре отпреме, слично оном који бројлерски пилићи пролазе пре транспорта у погон за прераду живине. Додавање мравље киселине у воду за пиће резултирало је смањењем броја S. Typhimurium у волу и епидидимису, као и смањењем учесталости S. Typhimurium-позитивних волова, али не и броја позитивног епидидимиса (135). Развој система за испоруку који могу заштитити органске киселине док су активне у доњем гастроинтестиналном тракту може помоћи у побољшању ефикасности. На пример, показало се да микроенкапсулација мравље киселине и њено додавање у храну смањује број Salmonella Enteritidis у садржају цекума (136). Међутим, ово може варирати у зависности од врсте животиње. На пример, Walia и др. (137) нису приметили смањење Salmonella у цекуму или лимфним чворовима код 28 дана старих свиња храњених смешом капсула мравље киселине, лимунске киселине и етеричног уља, и иако је излучивање Salmonella у фецесу смањено 14. дана, није смањено 28. дана. Показали су да је спречен хоризонтални пренос Salmonella између свиња.
Иако су се студије мравље киселине као антимикробног средства у сточарству првенствено фокусирале на салмонелу која се преноси храном, постоје и неке студије усмерене на друге гастроинтестиналне патогене. Ин витро студије Кованде и др. (68) сугеришу да мравља киселина може бити ефикасна и против других гастроинтестиналних патогена који се преносе храном, укључујући Escherichia coli и Campylobacter jejuni. Раније студије су показале да органске киселине (нпр. млечна киселина) и комерцијалне смеше које садрже мрављу киселину као састојак могу смањити нивое Campylobacter-а код живине (135, 138). Међутим, као што су раније напоменули Бејер и др. (67), употреба мравље киселине као антимикробног средства против Campylobacter-а може захтевати опрез. Ово откриће је посебно проблематично за додатке исхрани код живине јер је мравља киселина примарни извор енергије за дисање за C. jejuni. Штавише, сматра се да је део њене гастроинтестиналне нише последица метаболичког унакрсног храњења са производима мешане кисело-ферментационе ферментације које производе гастроинтестиналне бактерије, као што је формиат (139). Ово гледиште има извесну основу. Пошто је формат хемоатрактант за C. jejuni, двоструки мутанти са дефектима и у формат дехидрогенази и у хидрогенази имају смањене стопе колонизације цекума код бројлерских пилића у поређењу са дивљим типом сојева C. jejuni (140, 141). Још увек није јасно у којој мери спољашња суплементација мрављом киселином утиче на колонизацију гастроинтестиналног тракта од стране C. jejuni код пилића. Стварне концентрације формата у гастроинтестиналном тракту могу бити ниже због катаболизма формата од стране других гастроинтестиналних бактерија или апсорпције формата у горњем гастроинтестиналном тракту, тако да на ово може утицати неколико варијабли. Поред тога, формат је потенцијални производ ферментације који производе неке гастроинтестиналне бактерије, што може утицати на укупне нивое формата у гастроинтестиналном тракту. Квантификација формата у гастроинтестиналном садржају и идентификација гена формат дехидрогеназе коришћењем метагеномике могу расветлити неке аспекте екологије микроорганизама који производе формат.
Рот и др. (142) упоредили су ефекте храњења бројлерских пилића антибиотиком енрофлоксацином или смешом мравље, сирћетне и пропионске киселине на преваленцију Escherichia coli отпорне на антибиотике. Укупни и изолати E. coli отпорни на антибиотике избројани су у збирним узорцима фецеса бројлерских пилића старих 1 дан и у узорцима садржаја цекума бројлерских пилића старих 14 и 38 дана. Изолати E. coli тестирани су на отпорност на ампицилин, цефотаксим, ципрофлоксацин, стрептомицин, сулфаметоксазол и тетрациклин према претходно одређеним граничним вредностима за сваки антибиотик. Када су одговарајуће популације E. coli квантификоване и окарактерисане, ни енрофлоксацин нити допуна киселим коктелом нису променили укупан број E. coli изолованих из цекума бројлерских пилића старих 17 и 28 дана. Птице храњене храном са додатком енрофлоксацина имале су повећане нивое E. coli отпорне на ципрофлоксацин, стрептомицин, сулфаметоксазол и тетрациклин и смањене нивое E. coli отпорне на цефотаксим у цекуму. Птице храњене коктелом имале су смањен број E. coli отпорних на ампицилин и тетрациклин у цекуму у поређењу са контролном групом и птицама које су примале додатак енрофлоксацина. Птице храњене мешавином киселина такође су имале смањење броја E. coli отпорних на ципрофлоксацин и сулфаметоксазол у цекуму у поређењу са птицама храњеним енрофлоксацином. Механизам којим киселине смањују број E. coli отпорних на антибиотике, а да притом не смањују укупан број E. coli, још увек није јасан. Међутим, резултати студије Рота и др. су у складу са резултатима групе која је лечила енрофлоксацин. (142) Ово може бити показатељ смањене дисеминације гена отпорности на антибиотике код E. coli, као што су плазмид-везани инхибитори које су описали Кабезон и др. (143). Било би занимљиво спровести детаљнију анализу плазмидима посредоване резистенције на антибиотике у гастроинтестиналној популацији живине у присуству адитива за храну као што је мравља киселина и даље усавршити ову анализу проценом гастроинтестиналног резистома.
Развој оптималних антимикробних адитива за храну против патогена идеално би требало да има минималан утицај на целокупну гастроинтестиналну флору, посебно на оне микробиоте које се сматрају корисним за домаћина. Међутим, егзогено примењене органске киселине могу имати штетне ефекте на резидентну гастроинтестиналну микробиоту и донекле поништити њихова заштитна својства против патогена. На пример, Томпсон и Хинтон (129) су приметили смањен ниво млечне киселине у усеву код кокошака носиља храњених смешом мравље и пропионске киселине, што сугерише да је присуство ових егзогених органских киселина у усеву довело до смањења лактобацила у усеву. Лактобацили у усеву се сматрају баријером за салмонелу, и стога поремећај ове резидентне микробиоте у усеву може бити штетан за успешно смањење колонизације гастроинтестиналног тракта салмонелом (144). Ачикгоз и др. су открили да ефекти птица на доњи гастроинтестинални тракт могу бити мањи. (145) Нису пронађене разлике у укупној цревној флори или броју Escherichia coli код 42 дана старих бројлерских пилића који су пили воду закисељену мрављом киселином. Аутори сугеришу да би то могло бити последица метаболизма који се метаболише у горњем гастроинтестиналном тракту, као што су приметили други истраживачи са егзогено примењеним кратколанчаним масним киселинама (SCFA) (128, 129).
Заштита мравље киселине неким обликом енкапсулације може јој помоћи да доспе до доњег гастроинтестиналног тракта. (146) је приметио да микроенкапсулирана мравља киселина значајно повећава укупни садржај масних киселина кратког ланца (SCFA) у цекуму свиња у поређењу са свињама храњеним незаштићеном мрављом киселином. Овај резултат је навео ауторе да претпоставе да мравља киселина може ефикасно доспети до доњег гастроинтестиналног тракта ако је правилно заштићена. Међутим, неколико других параметара, као што су концентрације формијата и лактата, иако више него код свиња храњених контролном исхраном, нису се статистички разликовали од оних код свиња храњених незаштићеном формијатном исхраном. Иако су свиње храњене и незаштићеном и заштићеном мрављом киселином показале скоро троструко повећање млечне киселине, број лактобацила није промењен ниједним третманом. Разлике могу бити израженије код других микроорганизама који производе млечну киселину у цекуму (1) који нису детектовани овим методама и/или (2) чија је метаболичка активност погођена, чиме се мења образац ферментације тако да резидентни лактобацили производе више млечне киселине.
Да би се прецизније проучили ефекти адитива у храни за животиње на гастроинтестинални тракт домаћих животиња, потребне су методе микробиолошке идентификације веће резолуције. У протеклих неколико година, секвенцирање следеће генерације (NGS) 16S РНК гена коришћено је за идентификацију таксона микробиома и упоређивање разноликости микробних заједница (147), што је омогућило боље разумевање интеракција између адитива у исхрани и гастроинтестиналног микробиота животиња које се користе за исхрану, као што је живина.
Неколико студија је користило секвенцирање микробиома за процену одговора гастроинтестиналног микробиома пилића на суплементацију форматом. Оукли и др. (148) спровели су студију на 42 дана старим бројлерима којима су даване различите комбинације мравље киселине, пропионске киселине и масних киселина средњег ланца у води за пиће или храни. Имунизовани пилићи су били изложени утицају соја Salmonella typhimurium отпорног на налидиксну киселину и њихова цека су уклоњена у старости од 0, 7, 21 и 42 дана. Узорци цека су припремљени за 454 пиросеквенцирања, а резултати секвенцирања су процењени ради класификације и поређења сличности. Генерално, третмани нису значајно утицали на цекумни микробиом или нивое S. Typhimurium. Међутим, укупне стопе детекције Salmonella су се смањивале како су птице стариле, што је потврђено таксономском анализом микробиома, а релативна количина секвенци Salmonella се такође смањивала током времена. Аутори примећују да се са старењем бројлера повећавала разноврсност популације микроба у цекуму, при чему су најзначајније промене у гастроинтестиналној флори примећене у свим групама третмана. У недавној студији, Ху и др. (149) упоредили су ефекте воде за пијење и храњења храном допуњеном мешавином органских киселина (мравља киселина, сирћетна киселина, пропионска киселина и амонијум формиат) и виргиниамицина на узорке цекумског микробиома бројлерских пилића прикупљених у две фазе (1–21 дан и 22–42 дана). Иако су примећене неке разлике у разноврсности цекумског микробиома међу групама третмана у старости од 21 дан, нису откривене разлике у разноврсности α- или β-бактерија у старости од 42 дана. С обзиром на недостатак разлика у старости од 42 дана, аутори су претпоставили да предност у расту може бити последица ранијег успостављања оптимално разноврсног микробиома.
Анализа микробиома фокусирана само на микробну заједницу цекума можда не одражава где се у гастроинтестиналном тракту јавља већина ефеката органских киселина из исхране. Микробиом горњег гастроинтестиналног тракта бројлерских пилића може бити подложнији ефектима органских киселина из исхране, као што сугеришу резултати Хјума и др. (128). Хјум и др. (128) су показали да се већина егзогено додатог пропионата апсорбује у горњем гастроинтестиналном тракту птица. Недавне студије о карактеризацији гастроинтестиналних микроорганизама такође подржавају овај став. Нава и др. (150) су показали да комбинација мешавине органских киселина [DL-2-хидрокси-4(метилтио)бутерна киселина], мравље киселине и пропионске киселине (HFP) утиче на цревну микробиоту и повећава колонизацију Lactobacillus у илеуму пилића. Недавно су Гударзи Боројени и др. (150) је показао да комбинација смеше органских киселина [DL-2-хидрокси-4(метилтио)бутерна киселина], мравље киселине и пропионске киселине (HFP) утиче на цревну микробиоту и повећава колонизацију Lactobacillus-а у илеуму пилића. (151) је проучавао храњење бројлерских пилића смешом мравље киселине и пропионске киселине у две концентрације (0,75% и 1,50%) током 35 дана. На крају експеримента, вољка, желудац, дисталне две трећине илеума и цекум су уклоњени и узети су узорци за квантитативну анализу специфичне гастроинтестиналне флоре и метаболита коришћењем RT-PCR. У култури, концентрација органских киселина није утицала на бројност Lactobacillus-а или Bifidobacterium-а, али је повећала популацију Clostridium-а. У илеуму, једине промене биле су смањење Lactobacillus-а и Enterobacter-а, док је у цекуму ова флора остала непромењена (151). При највишој концентрацији суплементације органским киселинама, укупна концентрација млечне киселине (D и L) је смањена у волу, концентрација обе органске киселине је смањена у желуцу, а концентрација органских киселина је била нижа у цекуму. Није било промена у илеуму. Што се тиче масних киселина кратког ланца (SCFA), једина промена у волу и желуцу птица храњених органским киселинама била је у нивоу пропионата. Птице храњене нижом концентрацијом органске киселине показале су скоро десетоструко повећање пропионата у волу, док су птице храњене две концентрације органске киселине показале осам, односно петнаест пута веће повећање пропионата у желуцу. Повећање ацетата у илеуму било је мање од два пута. Генерално, ови подаци подржавају став да је већина ефеката спољашње примене органских киселина била евидентна у приносу, док су органске киселине имале минималне ефекте на микробну заједницу доњег гастроинтестиналног тракта, што сугерише да су обрасци ферментације резидентне флоре горњег гастроинтестиналног тракта могли бити измењени.
Јасно је да је потребна детаљнија карактеризација микробиома како би се у потпуности разјаснили микробни одговори на формиат у целом гастроинтестиналном тракту. Детаљнија анализа микробне таксономије специфичних гастроинтестиналних одељака, посебно горњих одељака као што је вољка, може пружити даљи увид у селекцију одређених група микроорганизама. Њихове метаболичке и ензимске активности такође могу одредити да ли имају антагонистички однос са патогенима који улазе у гастроинтестинални тракт. Такође би било занимљиво спровести метагеномске анализе како би се утврдило да ли излагање киселим хемијским адитивима током живота птица селектује „толерантније на киселину“ резиденцијалне бактерије и да ли би присуство и/или метаболичка активност ових бактерија представљала додатну препреку колонизацији патогена.
Мравља киселина се већ дуги низ година користи као хемијски адитив у сточној храни и као средство за закисељавање силаже. Једна од њених главних употреба је њено антимикробно дејство за ограничавање броја патогена у храни и њихове касније колонизације у гастроинтестиналном тракту птица. Студије in vitro су показале да је мравља киселина релативно ефикасно антимикробно средство против салмонеле и других патогена. Међутим, употреба мравље киселине у матрицама хране може бити ограничена великом количином органске материје у састојцима хране и њиховим потенцијалним пуферским капацитетом. Чини се да мравља киселина има антагонистички ефекат на салмонелу и друге патогене када се унесе путем хране или воде за пиће. Међутим, овај антагонизам се јавља првенствено у горњем гастроинтестиналном тракту, јер концентрације мравље киселине могу бити смањене у доњем гастроинтестиналном тракту, као што је случај са пропионском киселином. Концепт заштите мравље киселине путем енкапсулације нуди потенцијални приступ испоруци више киселине у доњи гастроинтестинални тракт. Штавише, студије су показале да је мешавина органских киселина ефикаснија у побољшању перформанси живине него примена једне киселине (152). Кампилобактер у гастроинтестиналном тракту може различито реаговати на формиат, јер може да користи формиат као донор електрона, а формиат је његов главни извор енергије. Није јасно да ли би повећање концентрације формиата у гастроинтестиналном тракту било корисно за кампилобактер, а то се можда неће десити у зависности од друге гастроинтестиналне флоре која може да користи формиат као супстрат.
Потребне су додатне студије како би се истражили ефекти гастроинтестиналне мравље киселине на непатогене резидентне гастроинтестиналне микробе. Преферирамо селективно циљање патогена без нарушавања чланова гастроинтестиналног микробиома који су корисни за домаћина. Међутим, ово захтева детаљнију анализу секвенце микробиома ових резидентних гастроинтестиналних микробних заједница. Иако су објављене неке студије о микробиому цекала код птица третираних мрављом киселином, потребно је посветити више пажње горњој гастроинтестиналној микробној заједници. Идентификација микроорганизама и поређење сличности између гастроинтестиналних микробних заједница у присуству или одсуству мравље киселине може бити непотпун опис. Потребне су додатне анализе, укључујући метаболомику и метагеномику, како би се окарактерисале функционалне разлике између композиционо сличних група. Таква карактеризација је кључна за успостављање везе између гастроинтестиналне микробне заједнице и одговора птица на побољшаваче на бази мравље киселине. Комбиновање вишеструких приступа за прецизнију карактеризацију гастроинтестиналне функције требало би да омогући развој ефикаснијих стратегија суплементације органским киселинама и на крају побољша предвиђања оптималног здравља и перформанси птица, уз ограничавање ризика по безбедност хране.
СР је написао ову рецензију уз помоћ ДД и КР. Сви аутори су дали значајан допринос раду представљеном у овој рецензији.
Аутори изјављују да је овај преглед финансирала компанија Anitox Corporation за покретање писања и објављивања овог прегледа. Финансијери нису имали утицаја на ставове и закључке изражене у овом прегледном чланку нити на одлуку о његовом објављивању.
Преостали аутори изјављују да је истраживање спроведено у одсуству било каквих комерцијалних или финансијских односа који би се могли тумачити као потенцијални сукоб интереса.
Др ДД би желео да се захвали на подршци Постдипломских студија Универзитета у Арканзасу кроз стипендију за изузетне наставнике, као и на континуираној подршци Програма ћелијске и молекуларне биологије Универзитета у Арканзасу и Одељења за прехрамбене науке. Поред тога, аутори би желели да се захвале Анитоксу на почетној подршци у писању ове рецензије.
1. Дибнер Џ. Џ., Ричардс Џ. Д. Употреба антибиотских стимулатора раста у пољопривреди: историја и механизми деловања. Poultry Science (2005) 84:634–43. doi: 10.1093/ps/84.4.634
2. Џоунс Ф.Т., Рик С.К. Историја развоја и надзора антимикробних средстава у храни за живину. Poultry Science (2003) 82:613–7. doi: 10.1093/ps/82.4.613
3. Брум ЛЈ. Субинхибиторна теорија антибиотских промотора раста. Poultry Science (2017) 96:3104–5. doi: 10.3382/ps/pex114
4. Сорум Х, Л'Абе-Лунд ТМ. Отпорност на антибиотике код бактерија које се преносе храном – последице поремећаја у глобалним бактеријским генетским мрежама. Међународни часопис за микробиологију хране (2002) 78:43–56. doi: 10.1016/S0168-1605(02)00241-6
5. Ван Имерсил Ф, Каувартс К, Девризе Л.А., Хесебрук Ф, Дукател Р. Адитиви у храни за контролу салмонеле у храни. Светски часопис за науку о живини (2002) 58:501–13. doi: 10.1079/WPS20020036
6. Ангуло ФЈ, Бејкер НЛ, Олсен СЈ, Андерсон А, Барет ТЈ. Употреба антимикробних лекова у пољопривреди: контрола преношења антимикробне резистенције на људе. Семинари о педијатријским инфективним болестима (2004) 15:78–85. doi: 10.1053/j.spid.2004.01.010
7. Лекшми М, Амини П, Кумар С, Варела МФ. Окружења за производњу хране и еволуција антимикробне резистенције код људских патогена животињског порекла. Микробиологија (2017) 5:11. doi: 10.3390/microorganisms5010011
8. Lourenço JM, Seidel DS, Callaway TR. Поглавље 9: Антибиотици и функција црева: историја и тренутно стање. У: Ricke SC, ур. Побољшање здравља црева код живине. Кембриџ: Burley Dodd (2020). Стране 189–204. DOI: 10.19103/AS2019.0059.10
9. Рицк СЦ. Бр. 8: Хигијена хране. У: Девулф Ј, ван Иммерзеел Ф, ур. Биосигурност у сточарској производњи и ветерини. Леувен: АЦЦО (2017). Пагес 144–76.